碧云天生產(chǎn)的BeyoDirect? RNA病毒直接qRT-PCR保存液(BeyoDirect? RNA Virus Direct qRT-PCR Preservation Solution)是一種中性、非滅活的病毒保存液,適用于活病毒保存??捎糜谘獫{、血清、無細胞體液、拭子及細胞培養(yǎng)上清等樣品采集后的保存和運輸,并且無須抽提RNA,可直接用于qRT-PCR,大大簡化RNA病毒的核酸檢測步驟。
本保存液也稱為病毒轉(zhuǎn)運液(Viral Transport Medium, VTM),含有抗生素和FBS。其中抗生素具有廣譜抗菌作用,防止加入樣品后其它微生物的生長,F(xiàn)BS做為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑,對病毒有一定的保護作用,可維持病毒的活性。 使用本保存液保存后的病毒未被滅活,可用于后續(xù)病毒的培養(yǎng)和分離。
除了常規(guī)的非滅活病毒保存液或病毒轉(zhuǎn)運液功能外,在使用合適的一步法qRT-PCR試劑盒情況下,本產(chǎn)品保存的病毒樣品也可以直接用做qRT-PCR的模板,大大簡化RNA病毒的核酸檢測步驟。本產(chǎn)品用于新型冠狀病毒(2019-nCoV) N基因慢病毒(新冠假病毒)樣品的保存效果如下表所示。一定量新冠假病毒加入咽拭子中并保存在本保存液中,4℃保存72小時,然后直接進行qRT-PCR,與病毒樣品置于-80℃保存(對照組)的Ct值相比,Ct值基本一致。qRT-PCR試劑盒為碧云天的新型冠狀病毒(2019-nCoV)雙熒光qRT-PCR試劑盒(D8006),此處的病毒數(shù)為每個PCR反應(yīng)體系中病毒的IU (Infection Unit)數(shù)。實驗檢測結(jié)果會因試劑盒、實驗條件、檢測儀器的不同而存在差異,圖中數(shù)據(jù)僅供參考。
本保存液(4℃/72小時) | 陽性對照組(-80℃保存) | 陰性對照組 | ||||||
病毒數(shù)(IU/PCR) | 400 | 40 | 4 | 400 | 40 | 4 | 無菌水 | |
Ct值 | 復(fù)孔1 | 24.95 | 29.26 | 32.31 | 24.71 | 28.55 | 31.88 | Undetermined |
復(fù)孔2 | 24.88 | 29.50 | 32.16 | 24.94 | 29.02 | 31.89 | Undetermined | |
復(fù)孔3 | 24.89 | 29.36 | 32.25 | 24.89 | 28.89 | 31.89 | Undetermined | |
平均值 | 24.91 | 29.37 | 32.24 | 24.84 | 28.82 | 31.89 | - |
本產(chǎn)品保存的病毒樣品也可以用于常規(guī)的RNA抽提方法進行RNA抽提,如Trizol法和離心柱法等,特別適用于碧云天的RNAeasy?病毒RNA抽提試劑盒(離心柱式) (R0035)。使用時直接取100μl液體樣品,作為RNA提取的對象即可。
使用本保存液采集后的標本應(yīng)盡快送檢,采集后應(yīng)盡可能在2-8℃、72小時內(nèi)完成轉(zhuǎn)運。如需更長時間的保存,可以放置于-80℃冰箱保存或使用碧云天的RNALater?病毒RNA穩(wěn)定保存液(R0141)保存樣品。
本產(chǎn)品100ml包裝可以用于約100-200個樣品的保存, 500ml包裝可以用于約500-1000個樣品的保存。
包裝清單:產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
R0145-100ml | BeyoDirect? RNA病毒直接qRT-PCR保存液 | 100ml |
R0145-500ml | BeyoDirect? RNA病毒直接qRT-PCR保存液 | 500ml |
— | 說明書 | 1份 |
4℃保存,一年有效。
注意事項:標本采集人員需要按照相關(guān)要求做好防護,后續(xù)操作應(yīng)在經(jīng)認證的II級生物安全柜中進行,遵循二級生物安全等級或更高標準。
如果保存的病毒樣品不經(jīng)RNA提取而直接用于qRT-PCR,建議選擇碧云天的BeyoFast? SYBR Green One-Step qRT-PCR Kit (D7268)、BeyoFast? Probe One-Step qRT-PCR Kit (D7277)或經(jīng)過驗證的其它試劑盒。由于病毒樣品的多樣性和不確定性,建議通過與提取法進行預(yù)實驗比較后再確認是否可以用于直接qRT-PCR。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。