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0.5M TCEP (pH7.0, for Mass Spectrometry)

產(chǎn)品編號:BYTST049-1ml 品牌:碧云天
產(chǎn)品特點:
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BYTST049-1ml 1ml 氧化還原試劑 ¥65.00

      TCEP即TCEP-HCl,全稱Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride,中文名為三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽。分子式為C9H15O6P·HCl,分子量為286.65,CAS號51805-45-9。本產(chǎn)品為0.5M TCEP溶液,采用質(zhì)譜(Mass Spectrometry)分析兼容的氨水(ammonium hydroxide)調(diào)節(jié)pH值至7.0,常用于質(zhì)譜分析中蛋白二硫鍵的打斷或其它蛋白質(zhì)組學中蛋白的還原。

圖1. TCEP-HCl的化學結(jié)構(gòu)式。

      TCEP是一種高效、無異味、不含硫醇基的水溶性還原劑,可選擇性還原多肽或蛋白質(zhì)中的二硫鍵。TCEP具有更佳的穩(wěn)定性、更廣的兼容性、更強的還原性、更好的選擇性,而且由于不含巰基,因此在多數(shù)應用中不必去除,從而廣泛應用于生物化學和分子生物學中,特別是在蛋白質(zhì)化學、蛋白質(zhì)組學中,是公認的DTT的良好替代物。
      TCEP對還原二硫鍵選擇性極強,除半胱氨酸外,幾乎不會與其它氨基酸有反應,并且能在更寬的pH值范圍包括酸性條件下使用,從而有效減少酰胺鍵的水解。TCEP的反應活性溫和、易溶、毒性小,且更容易操作,在酸性、堿性溶液中的穩(wěn)定性都很好。
      TCEP使用范圍廣泛,無論是普通的SDS-PAGE中蛋白的還原,還是一些特殊的實驗如固相金屬離子親和層析(IMAC)、質(zhì)譜、Ni柱純化等其它需要還原二硫鍵的實驗,也特別適用于組氨酸標記蛋白純化、馬來酰亞胺偶聯(lián)半胱氨酸殘基反應,它能夠預防半胱氨酸殘基形成二硫鍵,但不像DTT或β-巰基乙醇本身易與馬來酰亞胺反應。
      TCEP的特點有:無氣味——與DTT和β-巰基乙醇不同,TCEP是無異味的,有助于創(chuàng)造更加健康的實驗室環(huán)境;高效——5到50mM 的TCEP在數(shù)分鐘內(nèi)即可完全還原大多數(shù)多肽或蛋白的二硫鍵(與DTT等效);特異性——選擇性的完全還原甚至最穩(wěn)定水溶液中的烷基化二硫鍵;快速——在室溫和pH5的條件下,不到五分鐘即可還原蛋白的二硫鍵;穩(wěn)定——耐空氣氧化,無揮發(fā)性,與蛋白的其它功能基團不反應;通用性——可在廣泛pH范圍、鹽、去垢劑、溫度條件下還原多肽和蛋白;兼容性——不含巰基,因此在多數(shù)應用中不必去除還原試劑。
      TCEP與DTT主要特點的比較表格如下:

主要特點 TCEP DTT
氣味 輕微的硫磺氣味(臭味)
水溶解性 310g/L 50g/L
還原性 維持2-3周 維持3-7天
穩(wěn)定性 無揮發(fā)性,耐空氣氧化,基本不受金屬離子影響,與蛋白的其它功能基團不反應 揮發(fā)性弱,盡量減少暴露在空氣中的時間,在Ni2+存在下,快速氧化
pH工作范圍 1.5-8.5 6.5-9.0
工作濃度 5-50mM (大多數(shù)體系) 1-100mM
Ni2+柱純化His標簽的蛋白 適用 不適用
馬來酰亞胺標記蛋白反應 標記前不需要去除 標記前需要去除

      本產(chǎn)品建議用于質(zhì)譜等蛋白質(zhì)組學實驗中。如果是用于SDS-PAGE電泳中,建議使用0.5M TCEP (pH6.8, Adjusted with NaOH)(ST046),也可直接使用碧云天各類含TCEP的無氣味的蛋白上樣緩沖液(P0282、P0286、P0287、P0288、P0289、P0292)。
包裝清單:

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
ST049-1ml 0.5M TCEP (pH7.0, for Mass Spectrometry) 1ml
ST049-5ml 0.5M TCEP (pH7.0, for Mass Spectrometry) 5ml
說明書 1份

保存條件:
      -20℃或4℃保存,至少1年有效。
注意事項:
      本產(chǎn)品在磷酸鹽緩沖液中,尤其在中性或堿性磷酸鹽緩沖液中很不穩(wěn)定。因此若實驗過程需將本產(chǎn)品配制在PBS緩沖液中使用,必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
      大多數(shù)蛋白無需變性劑即可高效還原,但加入鹽酸胍等變性劑有助于將內(nèi)部二硫鍵暴露而易于和TCEP發(fā)生反應。
      不建議使用尿素作為變性劑,避免形成氰酸酯并與巰基反應。
      盡量防止金屬接觸TCEP溶液,否則會一定程度降低TCEP活性。在還原過程中向樣品緩沖液中加入5至20mM EDTA有助于防止巰基被二價金屬離子氧化,如Zn2+、Cu2+和Mg2+等。
      還原后樣品應盡快使用,長時間放置后會重新生成二硫化物。
      本產(chǎn)品在溶液中帶電荷,因此不適用于等電聚焦(IEF)實驗。
      TCEP對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
      本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明:
1. 直接用本產(chǎn)品替換原先步驟中的DTT,終濃度為5mM,處理時間為10分鐘,即可打斷二硫鍵。

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ST043-5g DTT 5g
ST043-25g DTT 25g
ST043-100g DTT 100g
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ST045-5g TCEP (DTT Substitute) 5g
ST045-25g TCEP (DTT Substitute) 25g
ST045-100g TCEP (DTT Substitute) 100g
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ST046-10ml 0.5M TCEP (pH6.8, Adjusted with NaOH) 10ml
ST049-1ml 0.5M TCEP (pH7.0, for Mass Spectrometry) 1ml
ST049-5ml 0.5M TCEP (pH7.0, for Mass Spectrometry) 5ml
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P0287-10ml SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(1X, 無氣味) 10ml
P0288-5ml SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(2X, 無氣味) 5ml
P0289-2ml SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(6X, 無氣味) 2ml
P0292-2ml 非變性PAGE蛋白上樣緩沖液(5X, 無氣味) 2ml


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