亚洲A∨无码一区二区_久久超乳爆乳中文字幕_曰韩亚洲av人人夜夜澡人人爽_天天综合色天天综合色h_久爱www人成视频在线观看

BeyoAmp? Extra-long DNA Polymerase

BeyoAmp? Extra-long DNA Polymerase (訂貨以英文為準(zhǔn))

編號:BYTD7213S
貨號 品牌 包裝 目錄價 您的價格 庫存 數(shù)量 購買
BYTD7213S 碧云天 200U ¥130.00
產(chǎn)品名稱 BeyoAmp? Extra-long DNA Polymerase
中文名稱 BeyoAmp? Extra-long DNA Polymerase

碧云天生產(chǎn)的BeyoAmp? Extra-long DNA Polymerase,是一種通過基因重組改造而獲得的具有超強(qiáng)(4kb/min)、超長(35kb)擴(kuò)增能力的高度熱穩(wěn)定的DNA聚合酶,具有擴(kuò)增速度極快,保真度極高,短時間內(nèi)即可輕松實(shí)現(xiàn)35kb λDNA片段擴(kuò)增等突出優(yōu)點(diǎn)(參考圖1)。推薦用于5kb甚至30kb以上長片段的PCR擴(kuò)增。
BeyoAmp? Extra-long DNA Polymerase使用單體酶完成超長片段擴(kuò)增。同類產(chǎn)品如NEB的LongAmp? Taq DNA Polymerase、Thermo的Scientific Extensor Long Range PCR Enzyme Mix、Promega的GoTaq? Long PCR Master Mix等進(jìn)行超長片段擴(kuò)增大多采用雙酶體系,即結(jié)合具有強(qiáng)擴(kuò)增能力的DNA聚合酶和具有校對功能的DNA聚合酶來實(shí)現(xiàn)保真性高的長片段擴(kuò)增,而BeyoAmp? Extra-long DNA Polymerase和Thermo的GeneAmp? XL PCR Kit中使用的rTth DNA Polymerase XL (Extra Long)類似,不需要任何其它酶或者蛋白、多肽等輔助因子,即可突破單體酶一步完成長片段的擴(kuò)增。
BeyoAmp? Extra-long DNA Polymerase擴(kuò)增速度極快。擴(kuò)增小于6kb的DNA片段時,延伸每1kb只需要15秒;擴(kuò)增大于6kb的DNA片段時,延伸每1kb也只需要30秒。BeyoAmp? Extra-long DNA Polymerase由于其超快的擴(kuò)增速度,因而可以大大縮短超長片段每個PCR循環(huán)的擴(kuò)增時間。本產(chǎn)品也同樣適用于短片段的擴(kuò)增,可以實(shí)現(xiàn)超快速的PCR擴(kuò)增。
BeyoAmp? Extra-long DNA Polymerase是一種高保真DNA聚合酶。它不僅可以非常高效地催化5'至3'方向的依賴于DNA模板的脫氧核苷酸的聚合反應(yīng),它同時還具有3'至5'的外切酶活性(proofreading activity),它的錯誤發(fā)生概率比Taq酶要低100倍,比pfu酶還要低約9倍。它可以輕松勝任具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的、非常長的DNA片段的準(zhǔn)確擴(kuò)增,因此它是目的基因擴(kuò)增和克隆的理想選擇。
圖1. BeyoAmp? Extra-long DNA polymerase以λDNA為模板,PCR擴(kuò)增不同長度片段(5-35kb)的電泳圖。電泳采用0.8%瓊脂糖凝膠,1XTAE,100V電泳180分鐘。
BeyoAmp? Extra-long DNA Polymerase的主要性能與Taq酶及同類產(chǎn)品的比較請參考下表。

Product Name Concentration Manufacture Velocity Target Size Fidelity Product end
Taq 5U/μl Beyotime/others 1min/kb <3kb 2.3×10-5/nt/cycle 3'overhangs
Pfu 5U/μl Beyotime/others 2min/kb <5kb 2.6×10-6/nt/cycle Blunt
Platinum Taq 5U/μl Thermo 30s/kb 15kb 3.8×10-6/nt/cycle 3'overhangs
Phusion HF 2U/μl Thermo 15-30s/kb 20kb 4.4×10-7/nt/cycle Blunt
LongAmp Taq 2.5U/μl NEB 50s/kb 30kb 1.2×10-5/nt/cycle 3'overhangs
Phusion HF 2U/μl NEB 15-30s/kb 20kb 4.6×10-7/nt/cycle Blunt
PfuUltra HF 2.5U/μl Agilent 1-2min/kb 17kb 1.3×10-6/nt/cycle Blunt
PfuUltra II FH - Agilent 15-30s/kb 19kb 1.2×10-6/nt/cycle Blunt
KOD Dash 2.5U/μl TOYOBO 30s/kb 18kb 5.8×10-6/nt/cycle 3'overhangs
KOD FX 1U/μl TOYOBO 30s-1min/kb 40kb 2.1×10-6/nt/cycle Blunt
BeyoFusion? 2.5U/μl Beyotime 15-60sec/kb >12kb 4.4×10-7/nt/cycle Blunt
BeyoFusion? Plus 2.5U/μl Beyotime 15-60sec/kb >12kb 2.2×10-6/nt/cycle 3'overhangs
BeyoAmp? 2.5U/μl Beyotime 15-30sec/kb 35kb 2.3×10-7/nt/cycle Blunt
BeyoAmp? Plus 2.5U/μl Beyotime 15-30sec/kb 35kb 1.1×10-6/nt/cycle 3'overhangs

來源:BeyoAmp? Extra-long DNA Polymerase通過大腸桿菌重組、表達(dá)、純化而獲得。
用途:超長DNA片段的準(zhǔn)確高效PCR擴(kuò)增、常規(guī)高保真PCR、點(diǎn)突變、克隆用途的PCR擴(kuò)增等。BeyoAmp? Extra-long DNA polymerase擴(kuò)增出來的DNA片段為雙平端,可以直接用于雙平端克隆,但不能直接用于常規(guī)的T載體克隆。如需用于T載體克隆,推薦選購BeyoFusion? Plus DNA polymerase。
活性定義:One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10 nmol of dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 74℃.
純度:不含DNA內(nèi)切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,滿足常規(guī)PCR反應(yīng)要求。
酶儲存溶液:20mM Tris-HCl (pH 7.5), 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 100mM KCl, 200μg/ml BSA and 50% (v/v) glycerol。
失活或抑制:酚抽提可以使BeyoAmp? Extra-long DNA polymerase失活。
包裝清單:

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
D7213S-1 BeyoAmp? Extra-long DNA polymerase (2.5U/μl) 80μl
D7213S-2 10X BeyoAmp? Buffer 400μl
說明書 1份

保存條件:
-20℃保存。
注意事項(xiàng):
PCR反應(yīng)非常靈敏,在使用BeyoAmp? Extra-long DNA Polymerase進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)時請注意避免微量待擴(kuò)增DNA的污染,并盡量設(shè)置不加模板的空白對照。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說明:
1.PCR反應(yīng)體系的設(shè)置:
a.溶解并混勻PCR反應(yīng)所需的各種溶液。將BeyoAmp? Extra-long DNA polymerase置于冰浴上或冰盒內(nèi)。
b.參考下表在冰浴上設(shè)置PCR反應(yīng)(如果有多個類似的PCR反應(yīng),可以先配制大體積的包含水、buffer、dNTP和BeyoAmp? Extra-long DNA polymerase的混合物,然后分裝到各PCR反應(yīng)管內(nèi)。根據(jù)情況,有時混合物中可以包括引物):

擴(kuò)增片段小于6kb 擴(kuò)增片段大于6kb
試劑 最終濃度 體積 最終濃度 體積
雙蒸水或MilliQ水 - (36.5-x)μl - (42-x-y)μl
10X BeyoAmp? Buffer 5μl 5μl
dNTP (2.5mM each) 0.25mM 5μl 0.5-0.75mM xμl
模板DNA 10pg-1μg* xμl 100-150ng* yμl
引物混合物(10μM each) 0.2μM each 1μl 0.4μM each 2μl
BeyoAmp? Extra-long DNA polymerase 2.5U/50μl 1μl 2.5U/50μl 1μl
總體積 - 50μl - 50μl

*對于不同類型模板DNA的推薦用量如下:哺乳動物基因組DNA 100ng-500ng;大腸桿菌基因組DNA 100pg-100ng;質(zhì)粒DNA 1ng-20ng。擴(kuò)增大于25kb的片段時,模板量宜適當(dāng)加大,但過多的模板DNA也容易導(dǎo)致非特異性的PCR產(chǎn)物。
c.用移液器輕輕吹打混勻或輕微Vortex混勻,室溫離心數(shù)秒,使液體積聚于管底。
d.如果所使用的PCR儀有熱蓋則省略本步驟。如果用的PCR儀沒有熱蓋,則在管內(nèi)滴入一滴礦物油(ST275 Mineral oil (礦物油))以防止蒸發(fā)。
e.各設(shè)置好的PCR反應(yīng)管置于PCR儀上,開始PCR反應(yīng)。
2.PCR反應(yīng)參數(shù)的設(shè)置可以參考如下表格:

步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 擴(kuò)增片段小于6kb 擴(kuò)增片段6-25kb 擴(kuò)增片段大于25kb 說明
1 1 92℃ 3min 3min 3min 最初變性
2 25~35 92℃ 30sec 30sec 30sec 變性
55℃ 30sec 30sec 退火
68℃ 15sec/kb 0.5min/kb 0.5min/kb* 延伸
3 1 68℃ 10min 15min 15min 延伸、補(bǔ)全
4 1 4℃ forever forever forever 臨時存放

說明:上面表格中15sec/kb表示,如果擴(kuò)增片段是4kb,那么68℃的延伸時間為1分鐘。0.5min/kb表示如果擴(kuò)增片段是4kb,那么68℃的延伸時間為2分鐘。*對于大于25kb的長片段PCR,建議采用兩步法,將退火/延伸溫度合并為68℃,可顯著提高擴(kuò)增特異性。
a.最初變性和變性的溫度設(shè)置為94℃,延伸溫度設(shè)置為72℃,其余條件不變時,都可以進(jìn)行正常的PCR擴(kuò)增,但擴(kuò)增效果會稍有下降。對于較難擴(kuò)增的序列,推薦使用92℃變性和72℃延長。
b.PCR反應(yīng)的設(shè)置需根據(jù)模板、引物、PCR產(chǎn)物的長度和GC含量等條件的不同設(shè)定不同的變性、退火和延伸的溫度和時間以及循環(huán)數(shù)等。
c.對于初次進(jìn)行的PCR,為盡量確??梢詳U(kuò)增出預(yù)期的PCR產(chǎn)物,可以把循環(huán)數(shù)設(shè)置為35。對于需進(jìn)行半定量或定量的PCR反應(yīng),循環(huán)數(shù)需要進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化,使PCR反應(yīng)沒有達(dá)到平臺期。

常見問題:
1.PCR產(chǎn)物非常少或沒有特異性條帶。
a.引物設(shè)計不佳是PCR過程中最常見的問題。請選擇適當(dāng)?shù)囊镌O(shè)計軟件進(jìn)行引物設(shè)計,注意引物的GC含量、二級結(jié)構(gòu)、二聚體、退火溫度、長度、特異性等方面的問題。在加入酶切位點(diǎn)等的引物中,一定要注意加入酶切位點(diǎn)等后整條引物的GC含量、二級結(jié)構(gòu)、二聚體、退火溫度、長度、特異性等方面的問題。在原有引物效果不佳的情況并且陽性對照引物可以正常工作的情況下,可以考慮更換引物。
b.待擴(kuò)增片斷GC含量偏高。GC含量較高的情況下PCR會變得相對比較困難,此時可以使用適合擴(kuò)增高GC含量DNA片斷的GC-rich buffer,并相應(yīng)地根據(jù)GC-rich buffer的要求或說明調(diào)整PCR反應(yīng)參數(shù)的設(shè)置。直接添加1-10%DMSO或5-20%甘油對于擴(kuò)增高GC含量的片段也有幫助。
c.PCR反應(yīng)設(shè)置時在室溫進(jìn)行容易導(dǎo)致非特異性條件。推薦在冰浴上設(shè)置PCR反應(yīng)。
d.由于引物存在一定的二級結(jié)構(gòu)或存在一定的引物二聚體,或引物偏短,導(dǎo)致退火效果不佳。此時可以采用Touch down等方法進(jìn)行退火,通常采用從65℃逐步緩慢降溫到55或50℃的方法,使退火更加充分。
e.退火溫度不佳,需要優(yōu)化。如果有溫度梯度PCR儀,則可以設(shè)置退火的溫度梯度,摸索退火的最佳溫度。如果沒有溫度梯度PCR儀,則可以通過多次PCR反應(yīng)摸索最佳的退火溫度。
f.延伸時間不足??梢栽谕扑]的延伸時間基礎(chǔ)上把延伸時間延長2-5倍,對于較難擴(kuò)增的片斷可以設(shè)置為每1kb延伸1分鐘。
g.待擴(kuò)增片斷GC含量較高或長度較長,變性不夠充分??梢哉{(diào)節(jié)起始變性條件至94℃ 2-4min甚至94℃ 5min。
h.在不同PCR儀上進(jìn)行PCR反應(yīng),避免有時PCR儀出現(xiàn)問題。
i.循環(huán)數(shù)不足,適當(dāng)延長PCR的循環(huán)數(shù)。通常循環(huán)數(shù)最高不必超過40,常用的循環(huán)數(shù)范圍為25-35。
j.模板含量太低,適當(dāng)加大模板量,或采用巢式PCR(nested PCR)或二次PCR。巢式PCR即為在原先設(shè)計的PCR引物內(nèi)側(cè)再設(shè)計一對PCR引物,然后對第一次PCR產(chǎn)物進(jìn)行稀釋后再進(jìn)行一次PCR擴(kuò)增,這樣一方面可以起到擴(kuò)增作用,同時也可以從第一次PCR產(chǎn)物中擴(kuò)增出特異性條帶。二次PCR則為比較簡單地用原有引物對第一次PCR產(chǎn)物進(jìn)行稀釋后再進(jìn)行一次PCR擴(kuò)增,可以起到擴(kuò)增作用,但不能去除非特異性條帶。
k.模板中含有抑制PCR反應(yīng)的物質(zhì),可以用適當(dāng)?shù)腄NA純化方法例如柱純化等純化模板DNA。
l.對PCR引物進(jìn)行脫鹽純化。
m.使用高質(zhì)量的dNTP混合物。
n.適當(dāng)增加DNA polymerase的用量。
o.當(dāng)產(chǎn)生較多非特異性條帶時,可以適當(dāng)提高退火溫度。
p.注意設(shè)置適當(dāng)?shù)年栃詫φ蘸完幮詫φ胀ǔ泻艽髱椭?br> q.使用完整、高純度、高質(zhì)量的DNA模板,且避免模板反復(fù)凍融。長片段DNA反復(fù)凍融過程中可能會出現(xiàn)斷裂的問題。
r.Mg2+濃度較低,或Mg2+與dNTP的比例不合適。使用本產(chǎn)品中提供的緩沖液就無需擔(dān)心鎂離子濃度的問題。
s.根據(jù)片段大小選擇合適的瓊脂糖凝膠濃度和電泳條件。大片段DNA的電泳需要使用低濃度的瓊脂糖凝膠和較低的電泳電壓,并電泳較長的電泳時間。
t.PCR反應(yīng)體系中有氣泡或者溶液蒸發(fā)。
2.雜帶較多或條帶彌散
a.退火溫度提高2-5℃。
b.減少DNA模板的用量。
c.PCR反應(yīng)設(shè)置時在室溫進(jìn)行容易產(chǎn)生非特異性條帶。推薦在冰浴上設(shè)置PCR反應(yīng)。
d.適當(dāng)減少BeyoAmp? Extra-long DNA Polymerase的用量。
e.適當(dāng)縮短延伸時間。

相關(guān)產(chǎn)品:

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
D7205 Taq DNA Polymerase 200U
D7207 Taq DNA Polymerase 1000U
D7209 Taq DNA Polymerase 5000U
D7211S Hot-Start Taq DNA Polymerase 200U
D7211M Hot-Start Taq DNA Polymerase 1000U
D7211L Hot-Start Taq DNA Polymerase 5000U
D7213S BeyoAmp? Extra-long DNA polymerase 200U
D7213M BeyoAmp? Extra-long DNA polymerase 1000U
D7215S BeyoAmp? Plus Extra-long DNA polymerase 200U
D7215M BeyoAmp? Plus Extra-long DNA polymerase 1000U
D7216 Pfu DNA Polymerase 200U
D7217 Pfu DNA Polymerase 1000U
D7218 BeyoTaq DNA Polymerase 200U
D7219 BeyoTaq DNA Polymerase 1000U
D7220 BeyoFusion? DNA Polymerase 200U
D7221 BeyoFusion? DNA Polymerase 1000U
D7222 BeyoFusion? Plus DNA Polymerase 200U
D7222B BeyoFusion? Plus DNA Polymerase 1000U
D7228 2X PCR Master Mix 400次
D7232 PCR Kit with Taq 400次
D7233 PCR Kit with Taq 2000次
D7237 PCR Kit with BeyoTaq 400次
D7241S HemoTaq? DNA Polymerase (Blood-resistant) 200次
D7241M HemoTaq? DNA Polymerase (Blood-resistant) 1000次
D7243S HemoTaq? HF DNA Polymerase (Blood-resistant) 200次
D7243M HemoTaq? HF DNA Polymerase (Blood-resistant) 1000次
D7245 Blood PCR Enhancer (2X) 2ml
D7248S PlantTaq? DNA Polymerase (Chlorophyll-resistant) 200次
D7248M PlantTaq? DNA Polymerase (Chlorophyll-resistant) 1000次
D7251 Easy-Load? PCR Master Mix (Blue, 2X) 100/400/2000/10000次
D7255 Easy-Load? PCR Master Mix (Green, 2X) 100/400/2000/10000次
D7259 Easy-Load? PCR Master Mix (Orange, 2X) 100/400/2000/10000次
D7281S 動物組織直接PCR試劑盒 100次
D7281M 動物組織直接PCR試劑盒 500次
D7283S 鼠尾基因型快速鑒定試劑盒 100次
D7283M 鼠尾基因型快速鑒定試劑盒 500次
D7285S Easy-Load? Blood Direct PCR Master Mix (2X) 100次
D7285M Easy-Load? Blood Direct PCR Master Mix (2X) 500次
D7287S Easy-Load? Blood Direct PCR Master Mix (HF, 2X) 100次
D7287M Easy-Load? Blood Direct PCR Master Mix (HF, 2X) 500次
D7289S Easy-Load? Plant Direct PCR Master Mix (2X) 100次
D7289M Easy-Load? Plant Direct PCR Master Mix (2X) 500次
D7371 dNTP Mixture (2.5mM each) 1ml
D7373 dNTP Mixture (2.5mM each) 250μl
FTUB322 BeyoGold? PCR管 (0.2ml, 凸蓋, 透明) 1000個/包
FTUB323 BeyoGold? PCR管 (0.2ml, 凸蓋, 透明) 1000個/包,10包/箱
FTUB328 BeyoGold? PCR八聯(lián)排管 (0.2ml, 凸蓋, 透明) 125排/盒
FTUB329 BeyoGold? PCR八聯(lián)排管 (0.2ml, 凸蓋, 透明) 125排/盒,10盒/箱
ST876-100ml BeyoPure? Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) 100ml
ST876-500ml BeyoPure? Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) 500ml


搜索質(zhì)檢報告(COA)
搜索MSDS
相關(guān)產(chǎn)品
電話

訂購、服務(wù)熱線:18321084675

傳真:0510-83590010

投訴建議: 18168919357

微信