碧云天生產(chǎn)的5'DNA Adenylation Kit，即5’DNA腺苷酰化試劑盒，是一種非常便捷和高效的通過酶學(xué)方法將單鏈DNA (ssDNA) 5’端腺苷?；揎椀脑噭┖小?
本試劑盒制備產(chǎn)生的5’端腺苷?；揎椀膯捂淒NA，常用于miRNA等3’端為羥基的RNA或3’端為羥基的單鏈DNA在克隆、高通量測序建庫或PCR檢測等時，在3’端添加的接頭。
本試劑盒進(jìn)行腺苷?；揎椃磻?yīng)時，需要腺苷酰化酶(Adenylase)、ATP和待腺苷?；揎椀?’端磷酸化的單鏈DNA。
本試劑盒腺苷?；揎椥矢?，通?？梢赃_(dá)到95%以上。對5’端磷酸化的單鏈DNA進(jìn)行腺苷?；揎椃磻?yīng)時，無論該單鏈DNA的3’端是否進(jìn)行了氨基化等封閉都可以得到高產(chǎn)量的腺苷?；a(chǎn)物。通常本試劑盒能將95%以上的5’端磷酸化的DNA (pDNA)轉(zhuǎn)化成腺苷?；疍NA (AppDNA)，因此腺苷?；漠a(chǎn)物通常不需要進(jìn)行電泳切膠回收，可以直接通常乙醇沉淀進(jìn)行進(jìn)一步濃縮后用于后續(xù)的連接反應(yīng)。
本產(chǎn)品以5’端磷酸化的單鏈DNA為底物，腺苷?；笇TP分解成AMP和PPi，AMP轉(zhuǎn)移到單鏈DNA的5’磷酸基團(tuán)上，形成腺苷?；瘑捂淒NA，從而制備出腺苷酰化接頭(linker)。
本試劑盒催化5’端磷酸化單鏈DNA生成5’端腺苷酰化修飾單鏈DNA的效果參見圖1。
圖1. 使用碧云天生產(chǎn)的5’ DNA Adenylation Kit制備5’端腺苷?；揎梿捂淒NA的效果圖。反應(yīng)體系為20μl，單鏈DNA的終濃度為5μM，反應(yīng)條件為65oC分別孵育15、30、45、60和90min，反應(yīng)完畢后85℃孵育5min終止反應(yīng)。電泳上樣前95℃孵育5min隨后置于冰浴以充分變性，尿素(7M)變性聚丙烯酰胺凝膠(15%)進(jìn)行凝膠電泳分析。如圖所示，本試劑盒在15min內(nèi)就可以將大部分5’端磷酸化單鏈DNA (pDNA)催化生成腺苷酰化的單鏈DNA (AppDNA)，孵育60min可以確保將95%以上的底物轉(zhuǎn)化成腺苷酰化修飾的單鏈DNA。
本產(chǎn)品也可以用于5’端磷酸化的單鏈RNA的5’端腺苷?；揎?，可根據(jù)具體應(yīng)用選擇合適的實(shí)驗(yàn)步驟，同時需要額外準(zhǔn)備R0102 RNase Inhibitor和R0021 DEPC水等。
本產(chǎn)品包含的Adenylase來源為嗜熱古細(xì)菌，在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)而獲得。
優(yōu)點(diǎn)：單步反應(yīng)即可完成5’端磷酸化修飾的單鏈DNA或RNA的腺苷酰化修飾，與傳統(tǒng)的化學(xué)方法相比較，更加簡便；對于底物轉(zhuǎn)化效率高達(dá)95%以上，無需切膠純化僅需酒精沉淀等即可用于后續(xù)反應(yīng)；在65℃這樣一個較高的溫度反應(yīng)，可以有效避免二級結(jié)構(gòu)對于5’端腺苷酰化修飾反應(yīng)的干擾；適用于pmol級別底物量的反應(yīng)體系，也可以很方便地放大至μmol級別底物量的反應(yīng)體系。
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| R0716S-1 | Adenylase | 20μl |
| R0716S-2 | 10X Adenylation Reaction Buffer | 25μl |
| R0716S-3 | ATP (1mM) | 25μl |
| — | 說明書 | 1份 |
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| R0716M-1 | Adenylase | 100μl |
| R0716M-2 | 10X Adenylation Reaction Buffer | 125μl |
| R0716M-3 | ATP (1mM) | 125μl |
| — | 說明書 | 1份 |
-20℃保存，至少一年有效。
注意事項(xiàng)：底物單鏈DNA或單鏈RNA的5’端磷酸化是必須的，3’端可以進(jìn)行氨基化等封閉，也可以不封閉。
本試劑盒提供的腺苷?；磻?yīng)體系可以按比例放大反應(yīng)體系，對腺苷?；a(chǎn)物的得率無顯著影響。
本試劑盒提供的Adenylase的最佳反應(yīng)溫度為65℃，并且在25℃時會出現(xiàn)去腺苷?；F(xiàn)象，因此反應(yīng)完成后推薦在85℃孵育5min以失活A(yù)denylase。如果沒有失活A(yù)denylase，后續(xù)經(jīng)歷室溫溫度條件時，會導(dǎo)致腺苷?；嚷氏陆怠?/p>
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
黨沛 
