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Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)

Annealing Buffer for DNA Oligos(5X) (訂貨以英文為準(zhǔn))

編號(hào):BYTD0251
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BYTD0251 碧云天 1ml ¥89.00
產(chǎn)品名稱(chēng) Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)
中文名稱(chēng) Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)

碧云天生產(chǎn)的Annealing Buffer for DNA Oligos (5X),即DNA寡核苷酸退火緩沖液,是一種經(jīng)過(guò)我們多次實(shí)驗(yàn)證實(shí)、可以用于DNA oligo退火的緩沖液。該退火緩沖液不僅可以用于常規(guī)的DNA oligo的退火,而且特別適合于較難退火的用于RNAi(也稱(chēng)siRNA)質(zhì)粒構(gòu)建的DNA oligo的退火。用于RNAi質(zhì)粒構(gòu)建的DNA oligo通常由于含有約20個(gè)左右的互補(bǔ)序列,極易自身形成發(fā)夾結(jié)構(gòu),從而影響兩條DNA oligo的正確退火。使用碧云天生產(chǎn)的Annealing Buffer for DNA Oligos (5X),可以有效避免DNA oligo自身形成發(fā)夾結(jié)構(gòu),并且兩條oligo退火后可以直接和經(jīng)酶切、純化的質(zhì)粒連接。通常轉(zhuǎn)化后可以得到大量的陽(yáng)性克隆。
使用本試劑盒操作非常簡(jiǎn)單,只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)按照一定比例混合后,置于PCR儀上,約90分鐘即可完成。
如果一次退火反應(yīng)體積為100微升,一個(gè)包裝的退火緩沖液可以進(jìn)行50次退火反應(yīng)。
包裝清單:

產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱(chēng) 包裝
D0251 Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) 1ml
說(shuō)明書(shū) 1份

保存條件:
-20℃保存,一年有效。
注意事項(xiàng):
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) 只適合于DNA oligo的退火,不能用于RNA oligo 的退火。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說(shuō)明:
1. 把待退火的DNA oligo用經(jīng)滅菌的Milli-Q水或重蒸水配制成50μM。溶解Annealing Buffer for DNA Oligos (5X),混勻備用。
2. 如下設(shè)置退火反應(yīng)體系:

Nuclease-Free Water 40μl
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) 20μl
DNA oligo A (50μM) 20μl
DNA oligo B (50μM) 20μl
總體積 100μl

按照上述順序依次加入各種試劑,混勻。如果所用的PCR儀沒(méi)有熱蓋,滴加礦物油(mineral oil)以防止蒸發(fā)。
3. 如下設(shè)置PCR儀進(jìn)行退火反應(yīng):

步驟 溫度 時(shí)間 說(shuō)明
1 95℃ 2分鐘 讓oligo充分變性
2 每8秒下降0.1℃,降至25℃(注1) 約90分鐘 退火
3 4℃ 長(zhǎng)時(shí)間保持 暫時(shí)存放

注1:每8秒下降0.1℃,降至25℃的程序設(shè)置,以Bio-Rad的T100為例為:1. 95℃, 2:00; 2. 95o, 0.08, -0.1℃ per cycle; 3. GOTO step 2, 700X; 4. 4℃, ∞。
注2:如果所用的PCR儀不具備下降0.1℃的功能,也可以設(shè)置為每90秒下降1℃。程序設(shè)置以Bio-Rad的T100為例為:1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 1:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2, 70X; 4. 4℃, ∞。
注3:如果條件有限,也可以將水浴鍋加熱至95℃,把PCR管放在水浴鍋中,或者把煮沸的熱水加入到保溫杯或保溫瓶中,待水溫降到95℃時(shí)放入PCR管。所用水量控制在1-2小時(shí)內(nèi)自然降溫至25℃左右。此方法的退火效果可能會(huì)比使用PCR儀略差一些。
4. 退火結(jié)束后可以直接用于連接反應(yīng),也可以在-20℃凍存?zhèn)溆?。如果退火結(jié)束后打算進(jìn)行酶切等其它反應(yīng),最好用純化試劑盒進(jìn)行純化,或者確保退火產(chǎn)物在反應(yīng)體系中體積不超過(guò)5%,以避免Annealing Buffer對(duì)后續(xù)的酶反應(yīng)體系的干擾。

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