碧云天的Porcine IL-10 ELISA Kit (Porcine Interleukin 10 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即豬白細(xì)胞介素10酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)豬血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-10的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為34.5pg/ml，與人、小鼠、大鼠的IL-10及豬的IFN-γ等均沒(méi)有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
白細(xì)胞介素10 (Interleukin 10, IL-10)又稱細(xì)胞因子合成抑制因子(Cytokine Synthesis Inhibitory Factor, CSIF)，屬于IL-10細(xì)胞因子家族。該家族中還包括IL-19、IL-20、IL-22、IL-24和IL-26/AK155。所有的IL-10家族成員都是一種分泌型的具有α-螺旋結(jié)構(gòu)的蛋白。豬IL-10分子量為18kDa，以非二硫鍵相連的同源二聚體形式存。IL-10前體蛋白包含175個(gè)氨基酸，其中包括18個(gè)氨基酸的信號(hào)肽和157個(gè)氨基酸的成熟肽段。成熟的豬IL-10與大鼠IL-10、小鼠IL-10、人IL-10、豚鼠(guinea pig) IL-10、犬IL-10和棉鼠(cotton rat) IL-10分別具有71%、70%、76%、75%、77%和71%的氨基酸同源性。
IL-10能夠作用于多種類型的細(xì)胞并產(chǎn)生不同的作用效果。例如作用于活化的B細(xì)胞時(shí)，IL-10能夠誘導(dǎo)漿細(xì)胞形成，促進(jìn)IgG或IgA的分泌。在IL-2存在的情況下，IL-10能夠作用于CD56+自然殺傷細(xì)胞，增加IFN-γ和TNF-α的分泌。當(dāng)作用于巨噬細(xì)胞時(shí)，IL-10會(huì)減少IL-1、TNF-α和IL-6的產(chǎn)生。IL-10能夠下調(diào)刺激分子和共刺激分子的表達(dá)，從而干預(yù)樹突狀細(xì)胞的抗原呈遞功能。另外，IL-10還能誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化為具有細(xì)胞毒性的CD16+巨噬細(xì)胞，而不是具有抗原呈遞作用的樹突狀細(xì)胞。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中豬IL-10的濃度，其原理見圖1。豬IL-10特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的豬IL-10會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗豬IL-10抗體后，生物素化抗豬IL-10抗體與豬IL-10結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。 豬IL-10濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中 豬IL-10濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| PI529-1 | 豬IL-10抗體預(yù)包被板 | 8孔×12條 |
| PI529-2 | 樣品分析緩沖液 | 5ml |
| PI529-3 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 10ml |
| PI529-4 | 豬IL-10標(biāo)準(zhǔn)品 | 2-4瓶 |
| PI529-5 | 豬IL-10生物素化抗體 | 10ml |
| PI529-6 | 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin | 10ml |
| PI529-7 | 洗滌液(20X) | 30ml |
| PI529-8 | TMB溶液 | 10ml |
| PI529-9 | 終止液 | 5ml |
| PI529-10 | 封板膜(透明) | 2張 |
| PI529-11 | 封板膜(白色) | 2張 |
| - | 說(shuō)明書 | 1份 |
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組份4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組份嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
黨沛 
